O objetivo do curso é oferecer aos alunos conceitos de bioquímica do DNA e de proteínas necessários para a produção heteróloga e purificação de proteínas, usando bactérias e leveduras como organismos produtores. Os conceitos necessários serão abordados por meio de tópicos de bioquímica do DNA recombinante e química de proteínas, relacionando a estratégia dos métodos com o rendimento de produção protéica.
Completar a formação dos alunos do curso de química em biologia molecular, bioquímica de proteínas e oferecer noções básicas de tecnologia do DNA recombinante aplicadas à expressão heteróloga de proteínas. O curso abordará todos os passos da expressão, desde a identificação do gene até a caracterização bioquímica da proteína purificada para confirmar a eficiência do sistema de expressão.
a) Estrutura e Replicação do DNA;
b) RNA e transcrição;
c) Código genético e tradução;
d) Estrutura e regulação dos genes;
e) Expressão gênica;
f) Técnicas básicas de tecnologia do DNA recombinante;
g) Identificação e amplificação de genes alvo;
h) Vetores de expressão;
i) Subclonagem: preparação e estratégia;
j) Expressão de proteína: planejamento e protocolos;
k) Expressão em E. coli;
l) Expressão em Leveduras;
m) Mutagênese sítio-dirigida de DNA;
n) Técnicas básicas de química de proteínas;
o) Análise da estrutura protéica por métodos espectroscópicos.
D.L. Nelson e M.M. Cox. Lehninger Principles of Biochemistry. 8rd Ed. 2021.;
- L. Stryer. Bioquímica. 7ª Edição. 2014. Guanabara Koogan, RJ, Brasil.;
- A. M. Lesk, Introduction to Protein Science: Architecture, Function, and Genomics Paperback
, Oxford Publishers, 2016.;
- Sambrook, J., and Russell, D.W. (2012) Molecular Cloning – A laboratory manual, Fourth Edition. Cold Spring Harbor Press, New York.;
- Lewin, B. Genes XII. Jones & Bartlett Learning, 2017;
Lodish et al. Molecular Cell Biology. 9th Edition. 2021,W.H. Freeman.
-Baneyx R., Protein Expression and Purification, Current Status and Future Trends, 2004, Taylor & Francis; 1ª edition.
- Pain, R.H. Mechanisms pf Protein Folding, Oxford University Press, USA; 2nd.
- Watson J., Gilman, M., Witkowski, J. & Zoller, M. Recombinant DNA: Genes and Genomes, 3a. Edition, 2007, Worth Publishers, NY, USA. •
- Protein Purification Techniques, A pratical approach, Edited by S. Roe, 2 edition, 2001, Oxford Press
- Spectrophotometry and Spectrofluorometry, A pratical approach, Edited by M. Gore, 2 edition, 2000, Oxford Press.;
- Lakowicz, J. R. (2006). Principles of fluorescence spectroscopy. Springer New York, NY.
- Relevant scientific articles
- Artigos científicos relevantes para os objetivos do curso
A avaliação constará da produção de resumos de artigos científicos (2 pontos), da apresentação oral de artigo científico (3 pontos) e de uma avaliação escrita (5 pontos), com nota máxima de 10 pontos.
Os conceitos serão atribuídos de acordo com a distribuição de notas apresentada a seguir: Conceito A: Nota igual ou superior a 8,5
Conceito B: Nota entre 7,0 e 8,4 Conceito C: Nota entre 6,9 e 5,0 Reprovado: Nota igual ou inferior a 4,9